1- هدف
هدف از تدوين اين دستورالعمل، تشريح روند انجام آزمایش تست IgM می باشد.
2 – دامنه کاربرد
اين دستورالعمل در واحد بیوشیمی برای انجام آزمایش IgM بر روی نمونه های سرم – پلاسما كاربرد دارد.
3 – مسئولیت اجراء
مسئوليت نظارت بر اجرای صحیح این دستورالعمل بر عهده مسئول کنترل کیفیت و سوپروایزر می باشد.
مسئوليت اجرای صحیح این دستورالعمل بر عهده مسئول واحد بیوشیمی می باشد.
4 – تعاریف
IgM ایمونوگلوبولینی است که مسئول گروه بندی ABO خون و همان فاکتور روماتوئیدی می باشد همچنین IgM در پاسخدهی ایمونولوژیکی به سایر عفونت ها (مثل هپاتیت ، سپسیس گرم منفی) ترشح می شود). IgM از جفت عبور نمی کند لذا ازدیاد آن در نوزادان نشانه عفونت داخل رحمی نظیر سرخجه CMV یا STD است.
با انجام این تست ایمونولوژیکی اختصاصی می توان عوامل ایمونولوژیکی عفونت یا آلرژی را مشخص کرد.
• عنوان آزمایش
Immunogloulin M (IgM)
• اصول انجام آزمایش
ایمنوتوربیدیمتری
IgM موجود در نمونه با آنتی سرم اختصاصی واکنش می دهد و کدورت حاصل در 340 نانومتر اندازه گیری می شود.
5- شرایط نمونه :
• حداقل مقدار نمونه :
هر تست به 13 میکرولیتر نمونه سرم یا پلاسما نیاز دارد.
• نوع نمونه :
سرم – پلاسما(هپارینه)
• شرایط نمونه برداری :
ناشتایی نیاز ندارد
• شرایط نگهداری و پایداری:
IgM درسرم در دمای 25- 15 درجه سانتی گراد 2 ماه و در دمای 8- 2 درجه سانتی گراد 4 ماه و در فریزر 6 ماه پایدار می باشد.
توجه : در صورت مشاهده ذرات یا رسوب در نمونه ابتدا ان را سانتریفیوژ کنید و از قسمت رویی برای ازمایش استفاده نمایید.
• شرایط رد یا قبول نمونه :
ندارد
6- مواد ، لوازم و تجهیزات
1. دستگاه اتو انالایزر Cobas Integra 400 و متعلقات مربوط به آن
2. لوله گاما /میکروکاپ
3. سمپلر و سر سمپلر
4. کیت IGM
5. پارافیلم
6. نمونه سرم پلاسما و ادرار (هر تست به 13 میکرو لیتر نمونه نیاز دارد.)
7. کنترل Percinorm protein or percinorm U و,percipath protein
8. IgM serum Protein T Standard
9. NaCl 9.0 %
10. Accelerator I
7-روش انجام آزمایش:
پس از تهیه ورک لیست روزانه، ابتدا نمونه ها را از واحد توزیع سرم تحویل گرفته و در ابتدا شرایط ظاهری نمونه ها را چک نمایید سپس در صورت مناسب بودن شرایط کنترل کیفیت مطابق دستورالعمل کنترل کیفیت آزمایشهای کمی (Quantitative)، نمونه ها جهت انجام آزمایش به دستگاه داده شود.
• کالیبراسیون :
جهت کالیبراسیون از cfas استفاده می گردد. پس از هر بار کالیبراسیون باید مجددا نمونه های کنترلی به دستگاه داده شوند. همچنین پس از هر بار سرویس دستگاه (از جمله تعویض پروب) نیز باید کالیبراسیون انجام گردد.
8- کنترل کیفیت :
به دستورالعمل کنترل کیفیت آزمایشهای کمی (Quantitative) مراجعه شود.
• دستورالعمل سریع کنترل کیفیت
در هر run جهت کنترل کیفی از Percinorm 1 (غلظت نرمال) و Percipath 2 (غلظت پاتولوژیک) استفاده می شود. اعداد بدست آمده برای هر کنترل در منحنی Levey-jennings نقطه گذاری می گردند. در صورتیکه که قانونی نقض شده باشد ابتدا به مسئول کنترل کیفیت اطلاع داده شود و طبق نظر ایشان عمل شود. به صورت کلی براساس خطای ایجاد شده با توجه به نوع آن اقدام لازم بعمل می آید. به عنوان مثال اگر قانون مربوط به خطای دقتی باشد (مثل 13S,R4S ) بار دیگر کنترل به دستگاه داده می شود. اگر قانون مربوط به خطای سیستماتیک باشد ( مثل 22S, 41S, 10X) احتمالا خطا مربوط به کالیبر نبودن تست می باشد. لذا تست را کالیبر کنید. دوباره کنترل را بدهید. در صورتیکه مشکل همچنان باقیست، معرف (کنترل، کالیبراتور، کیتها ) و دستگاه را چک کنید. به عنوان مثال: ابتدا کنترل جدیدی تهیه کنید. اگر مشکل رفع نشد کالیبراتور جدیدی تهیه کنید اگر مشکل رفع نشد کیت جدیدی را امتحان کنید. اگر مشکل رفع نشد برنامه های مربوط به عملکرد دستگاه را بررسی کنید. چنانچه به نتیجه نرسیدید با شرکت اکبریه تماس بگیرید و مشکل را مطرح نمایید. چنانچه با عدم همکاری شرکت مذبور روبرو شدید با مسئول فنی موضوع را مطرح کنید.
9- نحوه محاسبه نتایج در روش های کمی :
دستگاه به طور اتوماتیک غلظت IgM را محاسبه می کند.
(g/L × 1.03 = μmol/L)
(g/L × 1.00 = mg/dl)
10- محدوده مرجع (Reference Interval) :
بالغین : mg/dl 40 – 230
11- محدوده قابل اندازه گیری Reportable Range :
mg/dl 40 – 518
12- محدوده هشدار یا مقادیر بحرانی :
ندارد
• • ملاحظات ایمنی:
• در هنگام کار با نمونه ها حتما ازدستکش استفاده شود پس از پایان کار سطوح کاری با محلول ضدعفونی تمیز شوند.
• کیت در دمای محیط نگهداری شود.
13- ویژگی های آنالیتیک (خصوصیات و کارآیی آزمایش):
Within-run CV: بر طبق ادعا ی بروشور 2.4 % می باشد.
: Between-run CV بر طبق ادعای بروشور 3.2 % می باشد.
Expected: Bet.CV<3.0 BIAS<11.9 TE<16.8
14- محدودیت های انجام آزمایش (منابع بالقوه تغییر پذیری) :
(معیار : باز یابی در محدوده 10% ± از مقدار اولیه)
ایکتروس : تاثیری ندارد.
همولیز : اثری ندارد.
لیپمی : تا اندکس L = 150 mg/dl تاثیری ندارد.
15- اقدامات بعدی دربرخورد با نتایج غیر طبیعی :
در صورت بیشتر یا کمتر بودن از محدوده تست با تکرار صحه گذاری می شود .
16- عوامل مداخله گر :
در نمونه های RF مثبت غلظت IgM به نحو قابل توجهی افزایش می یابد.
• تداخلات دارویی :
افزایش : گاماگلوبولین ، هیدرالازین ، INH ، دیلانتین ، OCPs، متادون ، دکستران ، استروئیدها ، توکسوئید کزاز
17- چگونگی تفسیر نتایج :
• موارد افزایش:
ماکروگلوبولینمی والدن اشتروم، عفونت های مزمن (مثل هپاتیت – مونونوکلئوز عفونی – سارکوئیدوز)، بیماریهای اتوایمیون (مثلSLE- آرتریت روماتوئید)، عفونت های حاد، اختلالات مزمن کبدی (مثل سیروز صفراوی)
• موارد کاهش:
آگاماگلوبولینمی – سندرم نقص ایمنی اکتسابی – هیپوپروتئینمی (مثل سندروم نفرتیک یا آنتروپاتی های دفع کننده پروتئین) – ایمونوساپرسیوهای دارویی(مثل استروئیدها، دکستران) – مالتیپل میلومایIgA یا IgG
18- سایر موارد :
ندارد
19- مدارک مرتبط
1- – منحنی های کنترل کیفی
2- جداول CV و Bias مجاز WWW.WESTGARD.COM))
3- دستور کار با اتوآنالایزر Cobas Integra400
4- تفسیر قوانین وستگارد WWW.WESTGARD.COM))
20 – مراجع و ضمائم
1- بروشور کیت (2006- 06 -V5 En)
2- Henry’s Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, 2007: 21 edition.
3- تفسیر تست های تشخیصی Pagana، 2011.
دیدگاه خود را درج کنید