1. خانه
  2. آندورستندیول Andros tanediol

آندورستندیول Andros tanediol

هدف :
هدف از این آزمایش اندازه گیری کمیت هورمون آندورستندیول Andros tanediol در سرم انسانی است.
دامنه کاربرد :
کاربرد این آزمایش در تشخیص انواع پرموئی یا هیرسوتیسم Hirstutism خصوصا نوع ایدیوپایتیک در زنان، همچنین پیگیری در حال آن و نیز درمان سندروم تخمدان پلی کیستیک POC است.


مسئولیت اجرا :
مسئولیت اجرای صحیح این دستورالعمل بعهده مسئول بخش هورمون شناسی آزمایشگاه است.
مسئولیت نظارت بر اجرای صحیح آن بعهده مسئول کنترل کیفی و سوپروایزر آزمایشگاه است.
تعاریف :
عنوان- هورمون آندروستن دیول – گلوکورونید
این هورمون یک استروئید 19 کربنه است که باختصار 3∝Diol-G یا 5∝Diol-G، ∝ِDiol G نیز خوانده می شود. اساسا متابولیت هورمونهای تستوسترون و دی هیدروتستوسترون است که بطور وسیع از بافتهای محیطی مثل پوست و اطراف وزیکول های مو تولید شده و باعث تحریک ایجاد و رشد مو می شود. مقادیر غیر طبیعی آن باعث افزایش مو در زنان خصوصا در نواحی غیر طبیعی می شود.
در سالهای اخیر این هورمون برای بررسی هیرسوتیسم اسیدید پاتیک مورد توجه قرار گرفته است. پیش سازهای دیگر آن عبارت از DHEAS , DHEA، آندروستندیون Androstane dione هستند. در درمان هیرسوتیسم سطح آن کاهش می یابد. در عین حال در بیماران دیابتی تحت درمان با سیکلوسپورین A (اعم از زن و مرد) نیز سطح آن افزایش یافته علائم پرموئی نیز ظاهر می شود.
5- اصول آزمایش:
اساس واکنش الایزا رقابتی می باشد. هورمون بعنوان آنتی ژن عمل کرده از دو منبع نمونه بیمار و کونژوگه که معرف حاوی انتی ژن متصل به آنزیم است وارد چاهک می شود. در دیواره چاهک مولکولهای آنتی بادی اختصاصی متصل بوده و واکنش ایمنی بین آنتی بادی و هورمون وارد شده ایجاد میشود. در صورت افزایش نسبی مقدار هورمون نمونه نسبت به هورمون در معرف کونژوگه و یا بلعکس، نسبت کمپلکس ایمنی ایجاد شونده متصل به دیواره چاهک نیز متفاوت خواهد بود. در صورت بالا بودن مقدار هورمون نمونه اکثر کمپلکس تشکیل شونده از نوع فاقد آنزیم خواهد بود. نهایتا پس از شستشو و خارج کردن مواد اضافه سوبسترا وارد عمل می شود و در صورت حضور آنزیم در چاهک تغییر رنگ آبی دیده خواهد شد. پس از مدت معین با افزودن محلول استاپ واکنش متوقف گشته و شدت رنگ ایجاد شده خوانده می شود. در الایزای رقابتی شدت رنگ با فعالیت آنزیم محیط بستگی دارد و آن هم با غلظت هورمون نمونه تناسب عکس دارد.
5-شرایط نمونه :
نمونه قابل قبول سرم عاری از همولیز، ایکترو لیپمی یا هر نوع کدورت دیگر است. در عین حال سدیم آزاد و تیومرسال (نگهدارنده های متداول) با معرفها سازگاری ندارند. در صورت وجود ذرات معلق در سرم آن را سانتریفیوژ کنید.
حداقل نمونه- 200 میکرولیتر
پایداری- نمونه را در صورت عدم امکان آزمایش سریع می توان درC °4 بمدت 24 ساعت یا برای مدت طولانی تر در 10- درجه نگه داشت.
مواد و تجهیزات مورد نیاز
کیت انداره گیری آندروستن دیول الایزا ساخت IBL
سمپلرهای 50، 100، 150، 300 میکرولیتر با CV > 3%
میکسر (ورتکس)
شیکر دورانی با دور rpm 900-200
میکرو پی پت 8 کاناله مخصوص الایزا با مخزن معرف
الایزا ریدر و پرینتر متصل
الایزا واشر
آب دوبار تقطیر یا دیونیزه
دستمال کاغذی – تایمر و وسایل ایمنی (دستکش، روپوشکار و …)
روش آزمایش :
ابتدا کیت را از نظر کلیه معرفها و تاریخ انقضاء، صحت بسته بندی و غیره چک کنید و 20-15 دقیقه در دمای اتاق بگذارید.
معرف کونژوگه را به نسبت 1/50 با Assay Buffer رقیق کنید مثلا کونژوگه 40 mL را با بافر فوق به حجم 2000mL برسانید.
از چاهک اول شروع کرده ابتدا کالیبراتورها را به ترتیب شماره و سپس کنترل ها و نمونه های بیمار را وارد کنید. حجم نمونه 50 μL است.
از کونوژگه رقیق شده 100 μL میکرولیتر در هر چاهک بریزید.
بمدت 30 min دقیقه در دمای اتاق روی شیکر200 rpm انکوبه کنید پلیت را با پارافیلم یا درپوش بپوشانید.
در طی انکوباسیون محلول واش کاری را آماده کنید. معرف واش را به نسبت 1/10 با آب دوبار تقطیر یا دی یونیزه رقیق کند. این محلول در صورت نگه داری در 8-2 درجه تا 12 ماه پایدار است. می توانید حجم 500 میلی لیتر در نظر بگیرید که ساخت آن 50 میلی لیتر واش کنسانتره به اضافه 450 میلی لیتر آب خواهد بود.
پس از اتمام 30 دقیقه پلیت را تخلیه کنید برای هر چاهک تعداد 300 میکرولیتر و 3 بار محلول واش مصرف کنید می توانید از واش اتوماتیک استفاده کنید. پس از شستشو، سرم پلیت را روی حوله کاغذی برگردانید و چند ضربه ملایم بزنید. عدم وجود حباب در چاهکها را چک کنید.
با استفاده از سمپلر 8 کاناله مقدار 150 میکرولیتر معرف سوبسترا در هر چاهک بریزید و 15-10 دقیقه در دمای اتاق انکوبه کنید تا رنگ آبی ظاهر شود
از معرف استاپ stop 50 میکرولیتر در هر چاهک بریزید ترتیب ریختن معرفها را از یک جهت پلیت همواره حفظ کنید. پس از اتمام معرف استاپ پلیت را چند حرکت دورانی آرام بدهید. رنگ حاصله زرد بوده تا 20 دقیقه پایدار است.
دستگاه الایزا ریدر را روشن کنید فیلتر خوانش 450 نانومتر، در مقابل هوا صفر کنید. سپس پلیت را بخوانید. اگر جذب نوری خیلی بالا بدست آمد از فیلتر 405 یا 415 نانومتر استفاده کنید. به ادعای سازنده جذب نوری پائینتر حاصل می شود و خطائی ایجاد نخواهد کرد.
اعداد خوانده شده را برای کالیبراتور و کنترل ها کنترل کنید.
کنترل کیفیت :
در هر نوبت کاری از همه کالیبراتورها و کنترل ها استفاده کنید و نتایج حاصل را با اعداد روی لیبل ویال مقایسه کنید.
نحوه محاسبه نتایج کمّی :
محاسبه بطور خودکار توسط فتومتر انجام می شود منحنی لگاریتمی یا نیمه لگاریتمی است که جذب نوری در محور عمودی و غلظت در محور افقی قرار می گیرد. واحد گزارش جواب ng/ml می باشد.
محدوده جوابدهی :
0.25-50 ng/ml
محدوده مورد انتظار:
1.53-14.82 ng/ml مردان
0.22-4.64 زنان قبل از یائسگی
0.61-3.71 زنان یائسه
0.51-4.03 دوران بلوغ

  • اشتراک گذاری:

دیدگاه خود را درج کنید